由于細(xì)菌懸液的濃度與光密度(OD值)成正比,因此可利用分光光度計(jì)測(cè)定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度,并將所測(cè)的OD值與其對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長(zhǎng)曲線,此法快捷、簡(jiǎn)便。生長(zhǎng)曲線反映了單細(xì)胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng)時(shí)所表現(xiàn)出的群體生長(zhǎng)規(guī)律。依據(jù)其生長(zhǎng)速率的不同,一般可把生長(zhǎng)曲線分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。這四個(gè)時(shí)期的長(zhǎng)短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所改變。因此通過測(cè)定微生物的生長(zhǎng)曲線,可了解各菌的生長(zhǎng)規(guī)律,對(duì)于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。
比濁法的操作步驟如下:
(1)種子液制備取大腸桿菌斜面菌種1支,以無菌操作挑取1環(huán)菌苔,接人肉膏蛋白胨培養(yǎng)液中,靜止培養(yǎng)18h作種子培養(yǎng)液。
(2)標(biāo)記編號(hào)取盛有50mL無菌肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的250mL三角瓶11個(gè),分別編號(hào)為0,1.5,3,4,6,8,10,12,14,16,20hom。
(3)接種培養(yǎng)用2mL無菌吸管分別準(zhǔn)確吸取2mL種子液加入已編號(hào)的11個(gè)三角瓶中,于37℃下振蕩培養(yǎng)。然后分別按對(duì)應(yīng)時(shí)間將三角瓶取出,立即放冰箱中貯存,待培養(yǎng)結(jié)束時(shí)一同測(cè)定OD值。
(4)生長(zhǎng)量測(cè)定將未接種的肉膏蛋白胨培養(yǎng)基傾倒入比色杯中,選用600m波長(zhǎng)分光光度計(jì)上調(diào)節(jié)零點(diǎn),作為空白對(duì)照,并對(duì)不同時(shí)間培養(yǎng)液從0h起。依次進(jìn)行測(cè)定,對(duì)濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測(cè)定,使其OD值為0.10~0.65,經(jīng)稀釋后測(cè)得的OD值要乘以稀釋倍數(shù),オ是培養(yǎng)液實(shí)際的OD值。
(5)結(jié)果將測(cè)定的OD值填入表中,以時(shí)間為橫坐標(biāo),ODom值為縱坐標(biāo),繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線。目前市場(chǎng)上已經(jīng)有微生物比濁法測(cè)定儀銷售,這樣就可以大大減少實(shí)驗(yàn)工作量,提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
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